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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠骺軟骨分離自骨骺生長(zhǎng)板；骨骺生長(zhǎng)板位于長(zhǎng)骨兩端骨骺和骨干之間的軟骨組織，其中的骺軟骨細(xì)胞可分裂、成熟、肥大，終被骨組織所替換，對(duì)于長(zhǎng)骨生長(zhǎng)具有重要作用。幼稚的骺軟骨細(xì)胞位于軟骨組織的表層，單個(gè)分布、體積較小、呈橢圓形，長(zhǎng)軸與軟骨表面平行，越向深層的骺軟骨細(xì)胞體積之間增大呈圓形，細(xì)胞核圓形或卵圓形，染色淺，細(xì)胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的骺軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些骺軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。電鏡下，骺軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，骺軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的骺軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骺軟骨采用膠原酶-聯(lián)合消化并軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骺軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠纖維連接蛋白(FN)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： FN ELISA Kit

Mouse collagenase type II (Collagenase II) ELISA Kit 小鼠膠原酶II(Collagenase II)檢測(cè)試劑盒

Mouse6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1aELISAKit 小鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanPeptideYYELISAKit人多肽YY

同位素[α32P]dCTP聚合酶標(biāo)記微衛(wèi)星擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitxR大鼠硫氧還蛋白還原酶

DARS重組人 DARS 蛋白 Protein

STAT3(signal transducers and activators of transduction3 0.5mgSTAT3(signal transducers and activators of transduction3) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗原

YWHAE重組人 14-3-3 epsilon / YWHAE 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

FZD10 Protein Human 重組人 Frizzled-10 / FZD10 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

SLITRK1 Protein Human 重組人 SLITRK1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

STAT3(signal transducers and activators of transduction3 0.5mgSTAT3(signal transducers and activators of transduction3) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗原

FZD10 Protein Human 重組人 Frizzled-10 / FZD10 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

DARS重組人 DARS 蛋白 Protein

SLITRK1 Protein Human 重組人 SLITRK1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

YWHAE重組人 14-3-3 epsilon / YWHAE 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human glycogen phosphorylase II (GP-II) ELISA Kit 人糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)檢測(cè)試劑盒

HumanCreatineKinaseMBisoenzyme,CK-MBELISAKit 人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanBonemorphogeneticprotein7,BMP-7檢測(cè)試劑盒人骨成型蛋白7(BMP-7)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物總吲哚-3-乙酸(IAA)比色法定量檢測(cè)試劑盒(包括萃取)20次

Humansteroidproducingcellaoaibody,SCAELISAKit人抗類固醇生成細(xì)胞抗體(SCA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠骺軟骨細(xì)胞兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔血清總補(bǔ)體(CH50)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔乙酰受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

兔誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。