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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠毛囊分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側斜附在毛囊壁上，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結構比較復雜的器官附件組織。毛囊實際上是由結締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外，毛囊其余部分都是由表皮細胞分化而來。毛囊開口起始于皮膚表面，而每個毛囊又和一個或多個腺胞相連。每個腺胞解離成富含脂質的物質，卻又通過一個共同和毛囊相通連的皮脂腺導管將分泌物運送到皮膚表面排出。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠毛囊采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠毛囊經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)檢測試劑盒 ，英文名： SCF/MGF ELISA Kit

Porcine ierleukin 2 (IL-2) ELISA Kit 豬白介素2(IL-2)檢測試劑盒

肉毒桿菌(E/F型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMethylaseELISAKit大鼠甲基化酶

體液牛病毒性腹瀉病毒I型(BovineViralDiarrhoeaVirus-1;BVDV-1)定量PCR擴增檢測試劑盒20次

ELISAKitHpt/HP牛結合珠蛋白/觸珠蛋白

IL20重組大鼠 IL20 / Interleukin-20 蛋白 Protein

DRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原 0.5mgDRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原

PPM1G重組人 PPM1G / PP2C-gamma 蛋白 (aa 317-546, His 標簽) Protein

CD14 Protein Human 重組人 CD14 蛋白

OMD Protein Mouse 重組小鼠 Osteomodulin / OMD 蛋白

DRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原 0.5mgDRD4 receptor peptide 多巴胺受體-D4抗原

CD14 Protein Human 重組人 CD14 蛋白

IL20重組大鼠 IL20 / Interleukin-20 蛋白 Protein

OMD Protein Mouse 重組小鼠 Osteomodulin / OMD 蛋白

PPM1G重組人 PPM1G / PP2C-gamma 蛋白 (aa 317-546, His 標簽) Protein

小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 人可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)檢測試劑盒

Humanasymmeicaldimethylarginine,ADMAELISAKit 人不對稱二甲基精(ADMA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor5-HTELISAKit大鼠5羥色胺

飲料變質細菌(脂環(huán)酸芽孢桿菌屬Alicyclobacillus)鑒定16SrDNAPCR擴增檢測試劑盒20次

MouseLysozyme,LZMELISAKit小鼠(LZM)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠毛囊細胞型脂肪酸結合蛋白   英文名稱：   Human hea Fatty Acid Binding Protein   規(guī)格：      英文縮寫：   hFABP

幽門螺旋桿菌免疫球蛋白Y   英文名稱：   Human Helicobacter pylori IgY   規(guī)格：      英文縮寫：   HP-IgY

甲型肝病毒抗體IgG   英文名稱：   Human Hepatitis A Virus IgG   規(guī)格：      英文縮寫：   HAV IgG

乙型肝病毒e抗原   英文名稱：   Human Hepatitis B e Aigen   規(guī)格：      英文縮寫：   HBeAg