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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒酶免疫技術(shù)
點擊次數(shù):1452 更新時間:2018-05-17

抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒酶免疫技術(shù)是利用酶催化底物反應(yīng)的生物放大作用,提高特異性抗原-抗體免疫學(xué)反應(yīng)檢測敏感性的一種標(biāo)記免疫技術(shù)。該技術(shù)所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強、性質(zhì)穩(wěn)定、來源豐富、價格不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定,繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。

酶和酶作用的底物

     1.辣根過氧化酶(HRP):HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,純化方法也不復(fù)雜。它是一種糖蛋白,含糖量約18%;分子量為44kD;是一種復(fù)合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結(jié)合而成的一種卟啉蛋白質(zhì)。

     2.堿性磷酸酶(AP):ELISA試劑盒是從牛腸粘膜或大腸桿菌中提取。從大腸桿菌提取的AP分子量為80kD,酶作用的zui適pH為8.0;用小牛腸黏膜提取的AP分子量為l00kD,zui適pH為9.6.一般采用對**苯***(p-NPP)作為底物。它可制成片狀試劑,使用方便。在ELISA中應(yīng)用AP系統(tǒng),其敏感性一般高于應(yīng)用HRP系統(tǒng),空白值也較低。但由于AP較難得到高純度制劑,穩(wěn)定性較HRP低,價格較HRP高,制備酶結(jié)合物時得率較HRP低等原因,國內(nèi)在ELISA中一般均采用HRP.

3.其他的酶:有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶和脲酶等。β-半乳糖苷酸的底物常用4-甲基傘基-β-半乳糖苷,經(jīng)酶水解后產(chǎn)生熒光物質(zhì)4-甲基傘酮,可用熒光計檢測。抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒熒光的放大作用大大提高了方法的敏感度。AP也可應(yīng)用可產(chǎn)生熒光的傘基***作底物。其缺點是需要熒光計測定,而且如用固相載體直接作為測定容器,此載體不可發(fā)出熒光。

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抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒

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